实验室操作培训

BSP克隆测序法(Bisulfite Sequencing PCR,BSP)

BSP实验原理:

    BSP克隆测序法,是目前甲基化检测的金标准。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变;随后再CpG岛两端设计引物进行PCR,将目的产物纯化后进行TA克隆,每个克隆挑取阳性克隆测序,最后将测得的序列与原始序列比对,统计甲基化位点及数量,并分析甲基化程度。

 

 

 BSP实验流程:

 

优点:

    1、克服了MSP只能作定性研究,可做定量研究;

    2、敏感性高,待测DNA中5-甲基胞嘧啶分布极不均衡也可检测;

    3、引物设计相对简单。

 

缺点:

    1、价格高。

 

送样要求:
    1、组织样本:-20℃或-80℃低温冰箱中保存,液氮或者干冰运输;市内或短途运输可冰袋运输。若提供的材料为新鲜组织、血液细胞等生物材料,请提供足够提取2ug以上基因DNA的材料量。
    2、DNA样本:体积≥20ul,浓度≥100ng/ul,DNA总量≥2ug,-20℃保存,低温冰袋运输。
    3、血液样本:要求保存于抗凝管中或冻存管中,体积大于2ml,请用干冰运送,保证DNA不降解。
    4、样品为石蜡包埋组织切片的,要求提供10张组织切片光片(面积>10mm×10mm,厚度约5-10um)。

  

 

 

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