miRNA表达检测

    MicroRNAs(miRNAs)是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,其大小长约20~25个核苷酸。成熟的miRNAs是由较长的初级转录物经过一系列核酸酶的剪切加工而产生的,随后组装进RNA诱导的沉默复合体,通过碱基互补配对的方式识别靶mRNA,并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻译。最近的研究表miRNA参与各种各样的调节途径,包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等等。定量检测组织或细胞样本中的miRNA是功能研究的第一步,有助于人们进一步了解 miRNA与疾病发生及发展的关系,以便为疾病的早期诊断提供新的思路。miRNA表达检测也是对miRNA做进一步验证的重要手段。本公司主要通过实时定量PCR(Quantitative real-time PCR)和Northern Blotting方法检测miRNA的表达情况。

 

 

编号 服务名称 内容说明 周 期 价    格
UBL501 miRNA—ABI ARRAY 准确性高,不需要验证,人、大小鼠等 2-4周 9000元/样本
UBL502 miRNA—Agilent芯片 人、小鼠、大鼠等 2-4周 询价
UBL503 miRNA—华联ONE ARRAY芯片 人、大鼠、小鼠、水稻、酵母菌等 2-3周 询价
UBL504 miRNA—荧光定量表达检测 含RNA提取,反转录,每样本重复3次,内参重复3次,特异茎环法和Poly加A法 4-8周 询价
UBL505 miRNA—Northern Blotting 地高辛法、同位素标记等 4-8周 询价

 

成功案例:

    沈阳盛京医院、西北农林科技大学、上海瑞金医院、第二军医大、北京肿瘤医院、第三军医大学、同仁医院、上海曙光医院、东北林业大学、苏州大学、首都儿科研究所、301医院、306医院、天津医科大学、医科院阜外医院、协和医院急诊外科、上海中山医院、广州市南方医院、中国医学科学院基础医学研究所、青岛大学附属医院、北京工业大学、青岛大学附属医院、医科院实验动物所、医科院药用植物所、北京大学医学部、解放军第一医院附属医院、天津医科大学、聊城人民医院、山东大学、中国农业大学、国家人口计生委科学技术研究所、首都医科大学附属北京友谊医院等。

 

miRNA的研究思路:
1. 寻找相关miRNA
    1)根据miRBase数据库,客户提供对照样本和实验组样本,采用miRNA芯片或miRNA array进行表达谱分析,挑选出表达量有变化的miRNA;
    2)miRNA测序,寻找新的miRNA,并绘制表达谱,选出与研究相关的miRNA;

    3)参考相关文献,找到研究相关的miRNA。

2. 采用荧光定量PCR的方法验证表达量有变化的miRNA,锁定目标miRNA;

3. Northern blotting

4.  预测目标miRNA调控的靶基因,根据客户的研究目的确定需要验证的目标靶基因;

5.   靶基因验证
     
采用双荧光报告基因实验,主要包含初筛、突变验证预测的基因是否为目标miRNA的靶基因。

6. WB实验验证蛋白水平表达变化;

7. 细胞功能学实验
   1) 细胞迁移实验:主要采用划痕实验;
   2) 细胞侵袭实验;主要采用transwell试剂盒
   3) 细胞增殖实验:主要采用CCK-8试剂盒或MTT试剂盒进行检测;
   4) 细胞周期实验:主要使用流式细胞仪检测;
   5) 细胞凋亡实验:主要采用PI和annexin V双染试剂盒进行检测。

 

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