Kodfs DNA Polymerase

Kodfs DNA Polymerase

【试剂概述】

  本品是来自极端耐热古生菌Thermococcuskodakaraensis (KOD )的DNA聚合酶,经过改造后,通过融合得到一种新的超保真快速耐热DNA聚合酶,该酶的扩增速度是Taq DNA聚合酶的4-6倍,保真性约为Taq酶的50倍,耐热温度达到98℃,适用高GC的扩增。是目前我们知道的效率最高的热稳定DNA聚合酶。

  酶活性单位定义:PCR反应中,72℃条件下,30分钟内将10nmol的脱氧单核苷酸整合到DNA分子中所需的酶量为一个单位(U)。

  活性:Kodfs DNA聚合酶具有3’-5’ 外切酶活性,即校正功能,保证能快速地识别并纠正错误掺入的核苷酸,本品没有5’-3’外切活性。

  特点:扩增速度3-5 kb/min;保真性约为Taq DNA polymerase 50倍;可扩增10k以上的基因。

  应用:超保真PCR、基因克隆、载体扩增、基因定点突变、长片段扩增等。

商品编号  规格  售价
YH0003 40ul 1080元
YH0004 200ul 4800元

试剂组分

           组分名称           包装规格  
Kodfs DNA Polymerase (5U/ul)             40ul
5×Kodfs buffer            2ml
dNTP Mixture(2.5mM each)            200ul

保存条件-20℃恒温保存(避免反复冻融),有效期24个月。

使用方法】标准操作流程

1. 按照下表配制反应体系

组分     普通反应体系         高GC反应体系  
ddH2O add to 50µl add to 50µl
5×PCR buffer 10µl 10µl
dNTP(每种10mM) 1µl 1µl
DNA template 1µl 1µl
primer 1(10µM) 1µl 1µl
primer 2(10 µM) 1µl 1µl
Kodfs DNA polymerase 0.2µl 0.2µl
DMSO 0µl 1µl

2. 普通反应设置

   温度    时间 
94℃ 2min
94℃ 30s
 (Tm-5)℃  30s
72℃ (3k-5k)/min 
72℃ 5min
4℃ Hold
  25-30 cycle

高GC反应设置

   温度    时间 
98℃ 1min
98℃ 10s
 (Tm-5)℃  30s
72℃ (3k-5k)/min 
72℃ 5min
4℃ Hold
  25-30 cycle

【注意事项】

1.PCR反应条件应根据模板、目的片段大小、引物结构等具体条件不同,设定最佳反应条件。

2.加入适量DMSO有助于富含GC及长模板基因的扩增,1%-10%的DMSO不会降低酶的保真性。

3.PCR反应各组分应在冰上配置,以减少非特异性扩增。

4.此使用说明仅供研究使用。

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